在自然条件下，4月上旬开始繁殖，5到6月是产卵盛期，一直延续到9月还可产卵。繁殖的水温为18到30摄氏度，最适水温为22到28摄氏度。

雌泥鳅性成熟较雄泥鳅迟，体长5厘米时，雌鳅体内有一对卵巢，体长8厘米时，2个卵巢愈合在一起，成为1个卵巢，并由前端向后端延伸，这时整个卵巢发育开始成熟。

雌泥鳅怀卵量因个体大小不同而有很大差异。最小性成熟个体体长8厘米，怀卵量约2000粒左右，10厘米的怀卵量为7000到10000粒，体长12厘米的怀卵量12000到14000粒，体长15厘米的怀卵量为15000到18000粒，体长20厘米怀卵量为24000粒左右。怀卵量最多的可以超过6、5万粒。卵圆形，卵径0.8到1、0毫米左右，吸水后膨胀到1、3到1、5 毫米，卵黄色，为半黏性，黏附力不强。由于卵在卵巢内成熟度不一致，每次排卵量约为怀卵数的百分之五十到六十。