南美洲和北美洲分界线是巴拿马运河。位于中美洲国家巴拿马，横穿巴拿马地峡，连接太平洋和大西洋，是重要的航运要道，被誉为世界七大工程奇迹之一的“世界桥梁”。

巴拿马运河由美国建造完成，1914年开始通航。现由巴拿马共和国拥有和管理，属于水闸式运河。从一侧的海岸线到另一侧海岸线长度约为65千米（40英里），而由加勒比海的深水处至太平洋一侧的深水处约82千米（50英里），宽的地方达304米，最窄的地方也有152米。