高压蒸汽灭菌，用高温加高压灭菌，不仅可杀死一般的细菌、真菌等微生物，对芽胞、孢子也有杀灭效果，是最可靠、应用最普遍的物理灭菌法。主要用于能耐高温的物品，如培养基、金属器械、玻璃、搪瓷、敷料、橡胶及一些药物的灭菌。高压蒸气灭菌器的类型和样式较多，如：下排气式压力蒸气灭菌器是普遍应用的灭菌设备，压力升至103.4kPa（1.05kg/cm2），温度达121.3°C，维持15~30分钟，可达到灭菌目的。脉动真空压力蒸气灭菌器已成为最先进的灭菌设备。灭菌条件要求：蒸气压力205.8kPa（2.1kg/cm2），温度达132℃以上并维持10分钟，即可杀死包括具有顽强抵抗力的芽孢、孢子在内的一切微生物。