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请教梯度PCR设置梯度问题

更新时间: 2020-09-15 00:00:00

梯度PCR是为第一次使用某条引物,为了摸索最佳退火条件设定,拿到引物时,会得到建议的Tm值,由于两条引物不同,可算出一个退火温度,但这个退火温度不一定是最佳反应条件,因此可以设定退火的梯度,最常用的为10℃,这样每一个反应都有一个退火温度,最后电泳时,可以观察到在哪一个退火温度下,PCR产物产量和特异性都有保证,这样后面就可以选这个温度进行试验,但是对于已经有最佳条件的引物,或反应体系,不需要做梯度PCR。

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