1、包被的浓度：高浓度或低浓度会产生不一样的结果；

2、封闭：封闭的好与不好决定显色后底色会不会有，或者有多少；

3、孵育时间和温度：不同的孵育时间和温度出现的结果也会不同；

4、显色时间和温度：不同的显色时间和温度会造成不一样的结果；

5、整个缓冲液体系的配方：有的缓冲液能起到减少底色的作用。